集思慧远客户发表《硒-壳聚糖对大鳞副泥鳅生长和肠道健康的影响》

  为了确认硒-壳聚糖对大鳞副泥鳅生长和肠道健康的影响，从15个PVC贮水池中随机收集的了450条鱼（初始平均体重5.0± 0.2 g），分别喂食0（C组）、0.6（T1组）、1.2（T2组）、1.8（T3组）、2.4（T4组）mg/kg硒-壳聚糖60天。生长参数（包括最终平均体重，生长速率，增重，存活率）在对照和实验组间并未发现显著差异。当喂食超过1.2 mg/kg硒-壳聚糖，发现实验组酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（ALP）、溶解酵素（LZM）活性显著受到影响。随着硒-壳聚糖喂食量的增加免疫球蛋白M（IgM）含量也在上升，T4实验组和对照组之间差异最大。进行16S rRNA测序分析，在T3和对照组间共鉴定到296个OTUs。α多样性分析结果表明随着硒-壳聚糖喂食量的增加微生物总的丰度和种类也在增加。其中丰度增加的包含拟杆菌门、蓝藻细菌、厚壁菌门，而变形菌门、放线菌门、梭杆菌门丰度是下降的。表明硒-壳聚糖的补充可能会影响泥鳅肠道的健康，同时在泥鳅养殖中可能有增强免疫的作用。

  材料方法 

  大鳞副泥鳅共450只（初始平均体重5.0± 0.2 g），平均投放到15个相同PVC贮水池饲养，每三个PVC贮水池作为一组，分别喂食0（C组）、0.6（T1组）、1.2（T2组）、1.8（T3组）、2.4（T4组）mg/kg硒-壳聚糖60天。  

  生成参数调查：最终平均体重，生长速率，增重，存活率；  

  免疫指标调查：幽门盲囊至肛门前1cM间的肠子，切除并去除粪便，液氮速冻；ELISA kits检测酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、溶解酵素活性；  

  DNA提取样品：C组，T3组每个生物学重复取5条鱼，去除肠周围的脂肪堆积物，肠道内容物挤压出来并收集，混样用来提取DNA； 

  16S rRNA测序：Illumina HiSeq，V4-V5可变区，扩增引物515F (5′-GTGCCAGCMGCCGCGG-3′)，907R(5′-CCGTCAATTCMTTTRAGTTT-3′)； 

  统计学分析：SPSS v19.0；序列分析：UCLUST v1.1.579（相似度≥97%）； 

  多样性统计：QIIME v1.7.0，可视化：R v3.2，韦恩图：Mothur v1.30.1；

  研究结果  

  1、生长参数调查统计

  对照和喂食硒-壳聚糖实验组之间生长参数并未发现显著差异，但饲料转化率（FCR）T3组要显著低于对照组。

  2、肠道免疫参数调查统计

  随着喂食硒-壳聚糖量的增加，免疫球蛋白M（IgM）含量也在上升，当喂食超过1.2 mg/kg硒-壳聚糖，发现实验组酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（ALP）、溶解酵素（LZM）活性也显著增强。

  3、肠道微生物群落结构

  Chao、ACE指数表明T3实验组微生物丰度高于C（对照组），测序数据量覆盖几乎所有微生物。

  Shannon、simpson指数表明T3实验组微生物群落多样性高于C（对照组），表明T3组物种均匀度更高。

  两组样品中都占主要地位的是变形菌门、拟杆菌门和放线菌门细菌，且T3更高。

  两组样品共鉴定到296个OTUs，其中两组共有的OTUs有142个，大多数OTUs都数据变形菌门、拟杆菌门和蓝藻细菌。

  结论 

  1、针对初始长势相同的大鳞副泥鳅进行不同硒-壳聚糖饲喂量的处理，检测与空白对照之间鱼的生长指标，免疫指标及肠道微生物群落的变化，发现硒-壳聚糖的摄入量对生长指标几乎没有影响，但是显著提升了免疫球蛋白M含量和其他几种免疫活性相关酶的活性，同时肠道微生物丰度和种类随饲喂量的增加也上升。 

  2、对照和实验组间泥鳅肠道微生物共鉴定到296个OTUs，其中大多数都是变形菌门、拟杆菌门和蓝藻细菌，而且通过比较实验和对照组群落结构发现饲喂硒-壳聚糖使得拟杆菌门、蓝藻细菌、厚壁菌门细菌丰度增加，而降低变形菌门、放线菌门、梭杆菌门丰度。

  参考文献 

  Effects of Se-chitosan on the growth performance and intestinal health of the loach Paramisgurnus dabryanus (Sauvage).Aquaculture.2018.IF=2.71